E.coli (K-12 y lisis alcalina) HCP ELISA Kit

A diferencia de la técnica de desintegración física tradicional, los HCP en las muestras de pDNA se exponen a soluciones altamente alcalinas y se desnaturalizan durante el proceso de extracción, que conduce a una gran diferencia en los resultados de detección medidos por inmunoensayos. Este kit se basa en el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas en fase sólida (ELISA) con una técnica sándwich de doble anticuerpo para detectar proteínas residuales de células huésped (HCP) de cepas de K-12 de E.coli. En el ensayo se empleó un anticuerpo policlonal de oveja específico de HCP de E.coli (cepas K-12) preparado por lisis alcalina para capturar cualquier HCP restante en la muestra. La cobertura de anticuerpos se evalúa mediante el método actual de la corriente principal. Tanto los estándares de calibración como las muestras de prueba se añadieron simultáneamente a la placa de microtitulación recubierta con el anticuerpo de captura purificado por afinidad y seguido de incubación y lavado. El anticuerpo biotinilado se añadió a la placa de microtitulación para unirse a los HCP y después reaccionó con estreptavidina marcada con HRP (peroxidasa de rábano picante). Se añadió sustrato de TMB (3,3 ',5,5'-tetrametilbencidina) en la reacción, HRP catalizó la oxidación de TMB porH₂O₂Para producir un producto azul (pico máximo de absorción a 655 nm). A continuación, se añadió la solución de parada para terminar la reacción enzimática, dando como resultado un producto de color amarillo (máximo pico de absorción a 450 nm). Los valores de absorbancia a 450 nm de longitud de onda se correlacionaron positivamente con la concentración de HCP en el estándar de calibración y la muestra. La concentración de HCP en la muestra se puede calcular usando la curva dosis-respuesta.