Este kit está diseñado para determinar la presencia de Trypsina-análogo en los procesos de preparación de productos biológicos, capaz de identificar enzimas residuales como TrypLE™De Thermo Fisher Scientific, tripsina recombinante de Sartorius y HyrTryp™Desde Cytiva.
El análogo de tripsina es una enzima fúngica recombinante de alta pureza de origen no animal que se obtiene de la producción de fermentación de Fusarium oxysporum DSM2672. El análogo de tripsina escinde los péptidos en el lado C-terminal de los residuos de lisina y arginina como lo hacen las soluciones estándar de tripsina, que se pueden utilizar para disociar una variedad de células adherentes, incluyendo pero no limitado a HEK293, A549, queratinocitos epidérmicos humanos normales (NHEK) y células madre embrionarias (ESC).
Este kit se basa en el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas en fase sólida (ELISA) con una técnica sándwich de doble anticuerpo para detectar el análogo de tripsina residual en las muestras. Se empleó un anticuerpo policlonal de oveja específico para el análogo de tripsina en el ensayo para capturar cualquier análogo de tripsina restante en las muestras. Tanto el estándar de calibración (o muestra de prueba) como el anticuerpo análogo anti-tripsina marcado con HRP (peroxidasa de rábano picante) se agregaron simultáneamente a la placa de microtitulación. Que se recubrió con el anticuerpo de captura purificado por afinidad y seguido de incubación y lavado. A continuación, se añadió sustrato de TMB (3,3 ',5,5'-tetrametilbencidina) en la reacción, HRP catalizó la oxidación de TMB por H2O2Para producir un producto azul (pico máximo de absorción a 655 nm). A continuación, se añadió la solución de parada para terminar la reacción enzimática, dando como resultado un producto de color amarillo (máximo pico de absorción a 450 nm). Los valores de absorbancia a una longitud de onda de 450 nm se correlacionaron positivamente con la concentración del análogo de tripsina en el estándar de calibración y las muestras. La concentración del análogo de tripsina en las muestras se puede calcular usando la curva dosis-respuesta.
| Componentes | Condición de envío | Tamaño de la unidad | Método de detección |
| Estándar de calibración de tripsina-analógica | 2-8 ℃ | 96 pruebas | Sándwich ELISA |
| Tiras de microtiter antitripsina analógicas | |||
| Diluyente | |||
| Concentrado de tampón de lavado (10 ×) | |||
| Antitripsina-analógico: HRP (100 ×) | |||
| Sustrato TMB | |||
| Detener la solución | |||
| Película de sellado |
| Linealidad y rango | 0,16-10,24 ng/mL, R2> 0.990 |
| Exactitud | Tasa de recuperación = 94.0%-99.1% |
| LLOQ | 0,16 ng/ml |
| ULOQ | 10,24 ng/ml |
| Límite de detección | 0,0319 ng/ml |
| Repetibilidad | 3.6%-4.4% (CV≤ 20%) |
| Especificidad | No hay reactividad cruzada con análogos de proteínas comúnmente (e.g., tripsina humana recombinante, tripsina bovina recombinante y tripsina porcina recombinante) y líneas celulares comunes de ingeniería (e.g., MDCK, CHO, Vero, HEK293, E.coli, P.pastoris y células Sf9) |
| Robustez | Incubar a 25 ℃ ± 5 ℃, CV≤ 20% |
| La idoneidad del instrumento no se limita a Thermo Multiskan FC, Bio-Tek Synergy2 |
SHENTEK®Kit de preparación de muestras de ADN de células huésped residual
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