Este kit es adecuado para la tripsina porcina cuantitativa en procesos de purificación posteriores de productos biológicos, capaz de identificar tripsina porcina recombinante comúnmente disponible y tripsina derivada del páncreas porcino.
La tripsina porcina, una serina proteasa, escinde específicamente los enlaces peptídicos EN EL C-terminal de la lisina y la arginina. Se utiliza principalmente en la producción de insulina recombinante, activación de partículas de virus y procesamiento celular en procesos de fabricación de vacunas.
Este kit se basa en el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas en fase sólida (ELISA) con una técnica sándwich de doble anticuerpo para detectar tripsina residual en las muestras. Se empleó un anticuerpo policlonal de oveja específico para la tripsina en el ensayo para capturar cualquier tripsina restante en las muestras. Tanto los estándares de calibración como las muestras de prueba se añadieron a la placa de microtitulación prerrecubierta con anticuerpo de captura. Después de lavar las proteínas no unidas, el anticuerpo de detección y el anticuerpo anti-tripsina conjugado con biotina se añadieron al pocillo para formar el complejo. Después de la incubación y el lavado, se agrega estreptavidina conjugada con peroxidasa de rábano picante (Streptavidin-HRP). Después de otra etapa de incubación y lavado, se añadió sustrato de TMB (3,3 ',5,5'-tetrametilbencidina) en la reacción, HRP catalizó la oxidación de TMB por H2O2Para producir un producto azul (pico máximo de absorción a 655 nm). A continuación, se añadió la solución de parada para terminar la reacción enzimática, dando como resultado un producto de color amarillo (máximo pico de absorción a 450 nm). Los valores de absorbancia a 450 nm de longitud de onda se correlacionaron positivamente con la concentración de tripsina en los patrones de calibración y las muestras. La concentración de tripsina en las muestras se puede calcular usando una curva dosis-respuesta.
| Componentes | Condición de envío | Tamaño de la unidad | Método de detección |
| Estándar de calibración de tripsina | 2-8 ℃ | 96 pruebas | Sándwich ELISA |
| Tiras de microtitulación antitripsina | |||
| Solución de reconstitución | |||
| Concentrado de tampón de lavado (10 ×) | |||
| Antitripsina: Biotina (100 ×) | |||
| Streptavidin-HRP (100 ×) | |||
| Sustrato TMB | |||
| Detener la solución | |||
| Película de sellado |
| Linealidad y rango | 0,04-2,56 ng/mL, R2> 0.990 |
| Exactitud | Tasa de recuperación = 85.7%-111.0% |
| LLOQ | 0,04 ng/ml |
| ULOQ | 2,56 ng/ml |
| Límite de detección | 0,0144 ng/ml |
| Repetibilidad | 4.1%-7.7% (CV≤ 20%) |
| Especificidad | No hay reactividad cruzada con análogos de proteínas comúnmente (e.g., ovalbúmina y BSA de dos fabricantes diferentes, respectivamente), líneas celulares de ingeniería comunes y proteínas de bacterias de ingeniería (e.g., MDCK, CHO, Vero, 293T, E.coli y P.pastoris) |
| Robustez | Incubar a 25 ℃ ± 5 ℃, CV≤ 20% |
| La idoneidad del instrumento no se limita a Thermo Multiskan FC, Bio-Tek Synergy2 |
SHENTEK®Kit de preparación de muestras de ADN de células huésped residual
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