Métodos principales de pruebas de RCR

¿Qué es RCR Testing?

La prueba de RCR se refiere a una serie de métodos utilizados durante la preparación de productos de terapia celular CAR-T para detectar la presencia de Replication Competenent Retropavirus (RCR) o Replication Competenent Lentivirus (RCL). Como estos virus competentes para la replicación (RCV) Pueden surgir a través de mutaciones revertantes de vectores virales y poseer capacidades de replicación, potencialmente representan un riesgo de seguridad para los pacientes. El propósito deRCR pruebasEs garantizar la seguridad de CAR-T productos y prevenir la contaminación por RCV.

Métodos principales de pruebas de RCR

Método de cultivo de células indicadoras

Este método implica el cultivo conjunto de la muestra con células indicadoras y la observación de efectos citopáticos (CPE) o signos de replicación viral. Este método puede detectar visualmente la presencia de RCR pero lleva mucho tiempo.

Método ELISA (ensayo de proteínas p24)

Este método determina la presencia de contaminación por RCR mediante la detección de la presencia de la proteína del núcleo viral p24. La proteína p24 es una proteína central de retrovirus y Lentivirus, y su presencia generalmente indica la presencia de partículas de virus.

Método PCR/qPCR

Este método utiliza cebadores específicos para amplificar regiones específicas en el genoma viral (como los genes psi-gag o VSV-G) utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) o PCR cuantitativa (qPCR) tecnología para detectar la presencia de RCR. Debido a su corto tiempo de detección, alta sensibilidad y fuerte reproducibilidad, el método qPCR es ampliamente utilizado para las pruebas de liberación rápida de productos CAR-T.

Ensayo de actividad de transcriptasa inversa (PERT)

Este método determina la presencia de RCR mediante la detección de la actividad de la transcriptasa inversa. La transcriptasa inversa es una enzima esencial para la replicación de retrovirus y Lentivirus, y su actividad puede servir como marcador de la replicación viral.

Entre estos métodos, el método qPCR es preferido por muchas empresas de aplicación CAR-T debido a su eficiencia y sensibilidad. Con el método qPCR, los resultados de las pruebas RCR se pueden obtener en un tiempo relativamente corto, lo que garantiza la seguridad y la calidad de CAR-T productos.

En general, las pruebas de RCR son una parte indispensable del proceso de producción de los productos de terapia celular CAR-T, con el objetivo de garantizar que el producto no contenga virus competentes para la replicación, reduciendo así el riesgo de tumores secundarios y otros posibles problemas de seguridad para los pacientes que reciben el tratamiento.