Detección de agentes adventicios en productos biológicos

Los contaminantes de los agentes adventiciosos en las reservas de semillas, los sustratos celulares y las materias primas utilizadas en la producción de productos biológicos incluyen bacterias, hongos, micoplasmas, micobacterias y virus. La eliminación o control eficaz de estos agentes se logra mediante técnicas específicas y no específicas.

• Los métodos no específicos generalmente ofrecen un rango de detección amplio, pero a veces tienen limitaciones en la sensibilidad y posibles problemas de detección relacionados con el huésped, como las pruebas en animales y en cultivos.

• Métodos específicos se dirigen a patógenos específicos, tales como PCR para secuencias genéticas. Si bien la PCR tiene una alta sensibilidad, su limitación es la incapacidad para diseñar cebadores para secuencias desconocidas.

Para garantizar la máxima bioseguridad, es esencial seguir un enfoque integral que incluya el abastecimiento adecuado y el control de calidad de las materias primas y de partida, el cumplimiento de las Buenas Prácticas de Fabricación (GMP) principios (incluido el monitoreo ambiental y de personal y la Validación de procesos) y pruebas rigurosas para la verificación. Los siguientes métodos se utilizan generalmente para la detección de agentes aventureros:

1. Pruebas en vivo:

1) Utilizar huevos de gallina embrionados o animales para realizar pruebas.

2. Pruebas in Vitro:

1) Método de la cultura:

• Usando diferentes medios o agar.

2) Métodos de PCR:

• Para La detección viral específica de especies.

3) Métodos bioquímicos:

• Ensayos como el PERT para la transcriptasa inversa.

4) Secuenciación de genes:

• Para secuencias de genes virales o de bacterias no específicas.

5) Pruebas de Infectividad:

• Ensayos de células indicadoras para diferentes tipos de virus competentes para la replicación.

6) Microscopía Electrónica de Transmisión (TEM):

• Para observación morfológica.

Los métodos de detección de agentes adventicios varían según la etapa de bioprocesamiento, el tipo de muestra y el microorganismo objetivo. El uso de instrumentos y reactivos adecuados garantiza una detección confiable y sensible, incluso a bajos niveles de contaminación. No existe un método universal para la detección de agentes adventicios, pero seleccionar las técnicas correctas de la lista a continuación puede ayudarlo a encontrar los métodos más adecuados para sus necesidades.

1. detección Genómica:

• Utilizar la secuenciación de alto rendimiento para secuenciar el ADN de manera integral en productos biológicos y compararlo con bases de datos para identificar patógenos potenciales u otro ADN exógeno.

2. detección proteómica:

• Uso de espectrometría de masas para analizar proteínas en productos biológicos e identificar proteínas exógenas potenciales.

3. detección inmunológica:

• Emplear ensayos de anticuerpos o respuesta inmune para detectar componentes específicos en productos biológicos, identificando bacterias, virus u otras sustancias nocivas exógenas potenciales.

4. Detección de Microbiología:

• Uso de métodos de cultivo para aislar e identificar microorganismos y detectar patógenos potenciales.

5. Detección molecular:

• Usando PCR para detectar ADN en productos biológicos e identificar los microorganismos exógenos diana.

El método basado en PCR es la técnica de base molecular más común para la detección o cuantificación rápida y sensible de la contaminación microbiana. Al dirigirse a secuencias específicas de ADN, permite la detección de algunas especies específicas, que son difíciles de cultivar in vitro o requieren un largo período de cultivo, por ejemplo, la detección de especies de micoplasma por qPCR es esencial para pruebas rápidas de QC en apoyo de la fabricación de la terapia celular y génica.

10 cfu Mycoplasma qPCR Plot de amplificación